氯霉素眼膏正确的使用方法应该是首先将下眼睑翻开，眼睛向上转，这样可以将下穹窿部暴露，然后挤入条状的氯霉素眼膏在下眼睑内，用上眼睑将眼皮盖住，这样就能够有效的使眼膏在结膜囊内均匀地分布，点眼之后需要闭眼3-5分钟左右，以便发挥治疗作用。
患者通常一天使用3次氯霉素眼膏，用药前应洗净双手，用药时避免药膏接触其他黏膜，如口、鼻等，一天内最后一次用药的时间，最好是在晚上临睡前。使用后应拧紧瓶盖，以免污染药品，并放在儿童不能接触的地方，避免儿童误服。另外，儿童如果需要用药，应在成人监护下使用。
长期使用（超过3个月）本品可引起视神经炎或视神经乳头炎（特别是小儿）。长期应用本品的患者，应事先作眼部检查，并密切注意患者的视功能和视神经炎的症状，一旦出现即停药。
