ELISA,全称为酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay),是一种在免疫学实验方法中常用的检测技术,广泛应用于医学、生物学、食品安全、环境监测和药物筛选等领域。
ELISA主要利用抗原和相应的抗体之间的特异性反应,以及酶对底物的催化反应,从而达到检测抗原或抗体浓度的目的。其原理包括三个步骤,首先是由待测的物质(抗原或抗体)与固相载体上已经预先制备好的抗体或抗原形成免疫复合物,然后再添加与待测物质有特异性反应并且标记有酶的抗体,最后通过添加酶底物并测量酶反应产物的颜色深浅,可以定量或者半定量的测出待测物质的浓度。
ELISA的方法有直接法、间接法、夹心法和竞争法四种。直接法是最简单的,直接将酶标物质(抗原或抗体)与被测物质(抗原或抗体)进行反应,再观察酶的活性。间接法是先让被测物质与特异性抗体或抗原反应,再加入酶标的二抗,然后观察酶的活性。夹心法则先让被测抗原与固相抗体反应,再加入酶标的二抗,通过双重的免疫反应,提高了检测的灵敏度和特异性。竞争法则适用于测定小分子的抗原或者抗体。
总的来说,ELISA是一种灵敏度高、特异性强、简单快速、可批量检测的高通量筛查技术。在临床诊断、疾病筛查、新药研发、分子生物学研究等领域有着广泛应用。然而,其操作技术要求较高,一旦操作不当可能会引起假阳性或假阴性的结果。因此,检测时需要严格按照操作规程进行,同时需要使用高质量的试剂和标准品,以确保结果的准确性和可靠性。