心肌梗死早期（有严重低血压及心动过速时）、严重贫血、青光眼、颅内压增高和已知对硝酸甘油过敏的患者禁止使用本品。禁用于使用枸橼酸西地那非（万艾可）的患者，因为它会增强硝酸甘油的降压作用。
需要注意的是，暂时不清楚硝酸甘油片是否能影响胎儿的发育，为了安全起见，孕妇应在医生的指导下谨慎服用本品。还有，目前也不知道硝酸甘油能否从人乳汁中排出，建议哺乳期妇女用药前咨询医生，权衡利弊之后，再考虑是否使用本品。
需要注意的是，硝酸甘油片的外观上为片剂，不可直接吞服，是用于舌下含服，否则患者可能发生严重的不良反应。舌下含服时患者应尽可能采取坐位的姿势，以免因头晕而摔倒。还需要注意的是，患者服用本品期间，就不要再饮酒了，否则不利于疾病的治疗。患者的药量要按照医生的建议剂量服用，不要盲目服用或者参考别人的剂量来服用，以免出现严重的不良反应。
