冻卵的操作过程包括术前检查、促排卵、取卵、预处理、平衡与脱水、装载与冷冻、储存、解冻与复苏、后续处理等步骤。
1、术前检查
患者在接受取卵手术前,会进行一系列的身体检查,包括激素水平、超声检查、传染病筛查、遗传咨询等,以确保身体健康状况适合进行取卵,并确定最佳的取卵时机。
2、促排卵
根据患者年龄、基础性激素水平、窦卵泡数目等卵巢储备功能评价指标选择促排方案,一般是在月经期的第2或第3天通过注射促排卵药物来获得更多成熟卵母细胞,用药过程大约是7~12天。
3、取卵
取卵手术通常在全身麻醉或局部麻醉下进行,以确保患者在手术过程中保持舒适。医生会使用超声探头确定卵泡的位置,并通过阴道将一根细长的取卵针穿入卵巢。取卵针连接到负压吸引装置,用于将卵泡液及卵母细胞吸出。这个过程可能需要多次穿刺,以收集所有成熟的卵泡。
4、预处理
选择成熟的卵母细胞(通常是MⅡ期卵母细胞),这些卵母细胞在冷冻前需要进行评估,确保其质量适合冷冻。卵母细胞可能需要在特定的培养液中短暂培养,以保持其最佳状态。
5、平衡与脱水
将卵母细胞在含有较低浓度冷冻保护剂的溶液中平衡一段时间(通常为5~10分钟),使其逐渐适应冷冻环境。然后,将卵母细胞转移到含有更高浓度冷冻保护剂的溶液中再平衡一段时间(如1分钟),这一步骤是为了进一步脱水,减少细胞内水分,从而避免冷冻过程中冰晶的形成。
6、装载与冷冻
将含有卵母细胞的微量冷冻保护液滴装载到冷冻载体(如麦管、毛细管或尼龙环等)中。直接将冷冻载体投入液氮中进行快速冷冻。在这一过程中,冷冻保护剂的高浓度和快速降温速率(可达20000℃/min)使细胞内外液体迅速达到玻璃化状态,避免了冰晶的形成。
7、储存
冷冻后的卵母细胞在液氮中长期储存,直到需要使用。储存过程中,需要定期检查液氮罐的液氮水平和储罐的完整性,以确保卵母细胞的安全。
8、解冻与复苏
需要使用卵母细胞时,将其从液氮中取出,并迅速进行解冻。解冻过程需要精细控制温度和时间,以减少对卵母细胞的损伤。对解冻后的卵母细胞进行评估,以确定其复苏存活率和是否适合进一步使用(如体外受精)。
9、后续处理
解冻并复苏的卵母细胞可能需要进行体外受精(如常规体外受精或卵胞质内单精子显微注射),然后培养成胚胎。培养的胚胎可以在适当的时机进行胚胎移植,以尝试实现妊娠。